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沛歐定氮儀怎樣測(cè)定花生粕和豆粕中的粗蛋白含量?

更新時(shí)間:2017-12-12  |  點(diǎn)擊率:1903

花生粕是從經(jīng)壓榨提煉油料后的產(chǎn)品,而花生粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高, 其代謝能是粕類飼料中zui高的, 粗蛋白質(zhì)含量接近大豆粕,高達(dá)達(dá)48%以上。

可使用沛歐凱氏定氮儀SKD-100及紅外石英消化爐SKD-08S2來測(cè)定其粗蛋白含量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時(shí),則可用此法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含量。)

當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時(shí),其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水,而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨,并進(jìn)一步與硫酸作用天生硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是,這個(gè)反應(yīng)進(jìn)行得比較緩慢,通常需要加進(jìn)硫酸鉀或硫酸鈉以進(jìn)步反應(yīng)液的沸點(diǎn),并加進(jìn)硫酸銅作為催化劑,以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。消化完成后,在凱氏定氮儀中加進(jìn)濃堿,可使消化液中的硫酸銨分解,游離出氨,借助水蒸汽蒸餾法,將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨與溶液中氫離子結(jié)合,使溶液中的氫離子濃度降低,指示劑顏色改變,然后用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)鹽酸滴定,直至恢復(fù)溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量可計(jì)算出待測(cè)物中的總氮量。蛋白質(zhì)的含氮量為16%,即1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì),用凱氏定氮法測(cè)出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。 

1 實(shí)驗(yàn)材料 

1.1 器材    

SKD-100凱氏定氮儀 、SKD-08S2紅外石英消化爐(消化爐可以任意選擇消化孔數(shù),而不影響熱量散失)1.2 試劑
實(shí)驗(yàn)材料
器材
300ml凱氏燒瓶 4個(gè); 
移液管;錐形瓶; 
試管; 
小玻璃珠 
試劑 
98%濃硫酸分析純; 
35%氫氧化鈉溶液;
2%硼酸溶液; 
標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01mol/L)。 
粉末硫酸鉀-硫酸銅混合物 :K2SO4CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。 
混合指示劑(田氏指示劑):由50ml 0.1%甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml 0.1%甲基紅乙醇溶液混合配成,貯于棕色瓶中備用。 
樣品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。 
2.實(shí)驗(yàn)步驟
安裝凱氏定氮儀。 

  

消化:取4個(gè)300ml凱氏燒瓶并標(biāo)號(hào),各加1顆玻璃珠,在1號(hào)及2號(hào)瓶中各加樣品1ml,催化劑(K2SO4CuSO4·5H2O)200 mg,濃硫酸5 ml。留意加樣品時(shí)應(yīng)直接送進(jìn)瓶底,而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號(hào)及4號(hào)瓶中各加1 ml蒸餾水和與1、2號(hào)瓶相同量的催化劑和濃硫酸,作為對(duì)照。在透風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化。在消化開始時(shí)應(yīng)控制火力,不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后,適當(dāng)加強(qiáng)火力,繼續(xù)消化,直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力,冷卻至室溫。 (上海沛歐SKD-08S2消化爐可編程設(shè)定消化爐消化樣品的升溫曲線)

蒸餾: 蒸餾器的洗滌:用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀,在蒸汽發(fā)生器中加進(jìn)用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑,用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后,在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶,繼續(xù)蒸汽洗滌2分鐘,觀察錐形瓶?jī)?nèi)的溶液是否變色,如不變色則證實(shí)蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。移走錐形瓶,停止加熱,打開夾子。 (沛歐skd-100可以設(shè)定清洗程序)
蒸餾:設(shè)定取30%的氫氧化鈉溶液10ml,向玻璃杯中加進(jìn)蒸餾水約5ml稀釋液,設(shè)定蒸餾時(shí)間5分鐘,開始蒸餾。氨氣進(jìn)進(jìn)錐形瓶,瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續(xù)下一個(gè)蒸餾操縱。待樣品和對(duì)照均蒸餾完畢后,同時(shí)進(jìn)行滴定。 
滴定:用0.01mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量,硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點(diǎn)。 
結(jié)果計(jì)算: 
其中:
A為滴定樣品用往的鹽酸溶液均勻ml數(shù);
B為滴定對(duì)照液用往的鹽酸溶液均勻ml數(shù);
C為所取樣品溶液的ml數(shù)